區分東方蠑螈的雌雄，關鍵在于綜合觀察體型、泄殖腔形態、尾部特征和行為表現，而非依賴單一指標。最可靠的方法是結合泄殖腔結構與體態差異進行判斷。

雄性東方蠑螈體型通常較小，成體全長約66毫米，身體較為纖細，尾部粗壯圓潤，富有力量感。其最顯著的特征是泄殖腔：在繁殖期尤為明顯，呈隆起狀，孔裂較長，內側可見明顯的絨毛狀突起，觸感較軟，外觀如“小肉芽”突出。這一結構是為排出精包而演化出的特化器官，是鑒別雄性的黃金標準。此外，雄性在求偶時會表現出活躍行為：圍繞雌性游動、快速抖尾、輕觸其肛部，甚至咬其四肢以刺激產卵，這些行為在非繁殖期則極少出現。

雌性東方蠑螈體型更大，成體可達80毫米左右，腹部明顯肥大，尤其在臨近產卵期時，體態渾圓如“小氣球”。其泄殖腔則平伏、短小，表面光滑無突起，孔裂較短，內壁無絨毛結構，整體呈“丘狀隆起”或“平滑小坑”狀。雌性尾部相對細長，不如雄性粗壯，行動也較遲緩，尤其在繁殖期后，腹部因卵粒積累而膨大，肉眼可見。

顏色并非可靠依據。雖然兩者腹面均為朱紅色并帶黑斑，但雌雄顏色差異極小，僅個別個體可能因激素波動略有深淺，不能作為判斷標準。體型雖有趨勢，但個體差異和營養狀況會影響大小，僅作輔助參考。

若在寵物店或野外觀察，建議在光線充足時輕托蠑螈，從側面或下方觀察泄殖腔區域，動作務必輕柔，避免造成應激或損傷。若仍不確定，可對比多只個體，或參考繁殖期行為模式輔助判斷。